（一）菌種分離與培養(yǎng)

１．菌種來源

從我國各地培育蜜環(huán)菌情況看，對(duì)菌種來源可分為三類：一是采取野生菌種；二是從外地單位引入菌種，再進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)；三是純菌種分離和培養(yǎng)。但以純菌索粗壯、生長快、發(fā)射熒光強(qiáng)、抗逆性好，適應(yīng)性強(qiáng)的蜜環(huán)菌作為菌種。

２．純菌種的分離和培養(yǎng)

菌種組織分離與培養(yǎng)（母種）

配方一

馬鈴薯（去皮）２００克 ; 葡萄糖２０克 ; 瓊脂２０克 ; 水１０００毫升

配制方法：將馬鈴薯切成小塊放入鍋內(nèi)，加水 1000 毫升，煮沸２０分鐘，用紗布過濾，補(bǔ)水到 1000 毫升 , 放入切碎的瓊脂和葡萄糖，加溫溶解后，ｐＨ值自然，將培養(yǎng)基分裝三角燒瓶內(nèi)或分裝于試管中，滅菌、放斜面、冷卻接種．培養(yǎng)等，與其它食用菌的培養(yǎng)基配制及制種方法均相同。

配方二

麥麩４０克；葡萄糖２０克；瓊脂２０克；水１０００毫升

配制方法：麥麩加水１１００毫升煮微２０分鐘，用雙層紗布過濾，濾液補(bǔ)水至１０００毫升，放入瓊脂，加熱溶解后，再加葡萄糖煮至全溶，ｐＨ值自然。然后分裝試管或三角燒瓶，再高壓滅菌，放斜面、冷卻、接種、培養(yǎng)，即獲得母種。

如果是藥用，只培養(yǎng)蜜環(huán)菌絲體，也就是進(jìn)行一級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)和二級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)。

３。一級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)用斜面純菌種接種在一級(jí)種子培養(yǎng)液中，在一定的條件下進(jìn)行一級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)。

（１）一號(hào)種子培養(yǎng)液

配方：葡萄糖２０克；磷酸二氫鉀２克；磷酸氫二鉀１克；硫酸鎂１．５克；黃豆餅粉或花生餅粉１０克；酵母粉或麥芽１克一２克維生素 １ １０毫克；２０％馬鈴薯汁１０００毫升配制后調(diào)ＰＨ值到５．５，分裝于５００毫升的三角瓶內(nèi)，每瓶裝１５０毫升，高壓滅菌，備用。

（２）二號(hào)種子培養(yǎng)液

配方：馬鈴薯（去皮）２００克；葡萄糖２０克；硫酸鎂０．５克；磷酸二氫鉀１ . ５克，蛋白胨３克；維生素Ｂ1 １０毫克，清水１０００毫升培養(yǎng)液培養(yǎng)后，ｐＨ值自然，分裝于５００毫升三角燒瓶中，每瓶裝１５０毫升，高壓滅菌，備用。

（３）三號(hào)種子培養(yǎng)液

配方：麥麩５０克；葡萄糖２０克；硫酸鎂０．５克；磷酸二氫鉀１ .５ 克，蛋白胨５克，清水１０００毫升

配制方法：先將麥麩水煮２０分鐘，用紗布過濾，補(bǔ)水至１０００毫升，再將其經(jīng)配料加入濾液中溶解，ＰＨ值自然，分裝于５００毫升的三角燒瓶內(nèi)，每瓶裝５０毫升，高壓滅菌，備用。

接種方法：在無菌條件下用接種鉤將斜面菌種打碎，然后轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶內(nèi)。裝量１５０毫升的培養(yǎng)瓶可轉(zhuǎn)移一個(gè)斜面的菌種，裝量為５０毫升的瓶，可轉(zhuǎn)移１／３斜面的菌種。接種后用４層紗布夾回層無菌棉塞瓶口。接種完畢要扎緊瓶口，置室溫２５度的搖床上進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。培養(yǎng)１．５天一２天后，可見培養(yǎng)液發(fā)出熒光，３天一４天培養(yǎng)液呈米黃色，熒光增加，輕搖培養(yǎng)瓶時(shí)，液面布滿熒光點(diǎn)，５天一７天后熒光逐漸減弱。如果發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液的熒光突然消失，并出現(xiàn)大量泡沫，就表明已被雜菌污染，應(yīng)立即淘汰。培養(yǎng)液的熒光最強(qiáng)時(shí)，菌絲生長繁殖最旺盛，應(yīng)停止培養(yǎng)，即為一級(jí)種子。

優(yōu)質(zhì)的一級(jí)種子液粘稠，呈米黃色，或象米粥。菌液中長有黃豆粒大小的菌球體，如培養(yǎng)時(shí)間過長，菌液老化，菌球體則變?yōu)橹锌?、表面光滑的球體，但這種菌液仍能發(fā)微弱熒光。被污染的菌液，有時(shí)也有光滑的小球體，但不發(fā)熒光。

４．二級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)

為大量培養(yǎng)純菌種，或大量培養(yǎng)藥用的蜜環(huán)菌絲體，可在１０００毫升一５０００毫升的大燒瓶中進(jìn)行二級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)，也可利用發(fā)酵罐進(jìn)行培養(yǎng)，因此，也叫發(fā)酵培養(yǎng)。

（１）一號(hào)發(fā)酵培養(yǎng)液

配方：葡萄糖２０克；酵母粉３克；磷酸二氫鉀２．５克；硫酸鎂１．５克；麥麩２０克；維生素Ｂ 1 １０毫克；２０％馬鈴薯汁 1000 毫升培養(yǎng)液配制后，ｐＨ植調(diào)至５．５，分裝，高壓滅菌，備用。

（２）二號(hào)發(fā)酵培養(yǎng)液

配方：葡萄糖１％；白蔗糖２％；磷酸二氫鉀０．１５％；硫酸鎂０．０７５％；黃豆餅粉１％；花生餅粉１％配制后． P Ｈ值自然，分裝，高壓滅菌，備用。接種時(shí)，要嚴(yán)格按無菌制作的程序進(jìn)行。用移液管將菌種接入一級(jí)種子液，在２５度條件下培養(yǎng)３天一４天

5 ．種子液培養(yǎng)條件

（１）一級(jí)種子

溫度２４－２６度，在旋轉(zhuǎn)式搖床上培養(yǎng)１２０天一１４８天，偏心距為４厘米一６厘米，轉(zhuǎn)速２４０次／分鐘。

（２）二級(jí)種子

溫度２６－２８度，在往復(fù)式床上培養(yǎng)７２小時(shí)一 96 小時(shí)，沖程為７厘米，轉(zhuǎn)速為 90 次／分鐘。

（３）發(fā)酵罐

溫度２６－２８度，容量為４０立升的，投料２０立升，攪拌速度為 200 轉(zhuǎn)／分鐘，通氣量為１： 0 ．５－１： 0 ．８，培養(yǎng)９６－１２０小時(shí)。用乙醇提取，再濃縮，將提取物人藥。６．二級(jí)團(tuán)體擴(kuò)大培養(yǎng)為了利用蜜環(huán)菌伴栽天麻，可將蜜環(huán)菌采用固體擴(kuò)大培養(yǎng)，它比液體培養(yǎng)效果好。

二級(jí)固體菌種培養(yǎng)基（即原種培養(yǎng)基）

配方（１）：雜木屑或玉米芯粉６８％；玉米粉２０％；麥新１０％；蔗糖；２％。

配制方法：清水拌料，含水量６５％－７０％，裝瓶或裝袋，滅菌，冷卻后接種，在２０－２５度條件下培養(yǎng)２５天一３０天，即成二級(jí)固體菌種。

配方（２）：雜木屑４６％；玉米軸粉４０％；麥麩１０％；蔗糖２％；骨粉１％；石膏粉１％清水拌料，含水量６５％－７０％，裝瓶或裝袋，滅菌，冷卻后接種（方法同于一般食用菌），在２０－２５度條件下培養(yǎng)２５％－３０天，菌絲長滿培養(yǎng)基，即為二級(jí)固體菌種。

（二）擴(kuò)大生產(chǎn)

１．菌材和基礎(chǔ)培養(yǎng)料的選擇

（１）菌材的選擇

凡是闊葉樹種（松杉木不能用）都可以用來培養(yǎng)蜜環(huán)菌，也可作為培養(yǎng)天麻的菌材。未接菌的木棒或樹枝，統(tǒng)稱為菌材。把木棒接植蜜環(huán)菌，長出菌索，帶有菌索的木棒稱為菌棒。菌棒一般直徑４厘米一１０厘米，主要用于培養(yǎng)天麻。如果在２厘米一３厘米粗的樹枝上接種蜜環(huán)菌，樹枝上長出菌素，這樣的樹枝稱為菌技，是培養(yǎng)天麻的補(bǔ)充材料。

（２）基礎(chǔ)培養(yǎng)料的選擇

基礎(chǔ)培養(yǎng)料是蜜環(huán)菌和天麻生長發(fā)育繁殖所必需的基本物質(zhì)條件?；A(chǔ)培養(yǎng)料的優(yōu)劣將直接影響蜜環(huán)菌絲和天麻生長發(fā)育的質(zhì)量，所以，一定要選擇透氣性能良好，有機(jī)質(zhì)豐富，并疏松、易于滲水和保溫，酸堿度適宜的培養(yǎng)料，基礎(chǔ)培養(yǎng)料的配制方法如下：

天然腐殖土：即山林中的腐殖土，土質(zhì)疏松，團(tuán)粒結(jié)構(gòu)良，含有豐富的有機(jī)營養(yǎng)和無機(jī)鹽類，透氣和保水性能強(qiáng)，是較理想的基礎(chǔ)培養(yǎng)料。

半腐熟落葉加沙：晚秋收集闊葉樹落葉，加適量水，堆坑封蓋腐熟。來年春將樹葉取出加小米大小的砂子。樹葉和砂子的比例為５：１，作為基礎(chǔ)培養(yǎng)料。這種培養(yǎng)料體輕、疏松、營養(yǎng)豐富。

沙質(zhì)土壤：土壤疏松、透氣性和滲水性良好。

木屑加砂：選擇闊葉樹的粗鋸末加干凈的粗細(xì)混合砂。砂粒象高梁粒大小，事先將砂粒用清水洗凈再用，木屑和砂的比例為２：１或３：１。

稻殼加砂：用新鮮的稻殼加干凈的小米大小或高梁粒大小的砂子，稻殼和砂的比例為３：１。

２．培養(yǎng)菌棒和菌枝

為栽天麻時(shí)有充足的優(yōu)質(zhì)菌棒和菌枝，必須選擇適當(dāng)?shù)呐嗑鷷r(shí)間。最好在７月份開始培養(yǎng)菌棒、菌枝（氣溫在２３－２５度，濕度在６５％－７０％為宜）。８月中旬可以進(jìn)行一次擴(kuò)大培養(yǎng)，１１月份開始栽天麻。也可在９月份開始在室內(nèi)培養(yǎng)。此時(shí)室內(nèi)自然溫度在２０度以下，菌棒、菌枝發(fā)菌較慢，但菌絲生命力強(qiáng)，菌索健壯。用這種菌棒、菌技在第二年３月份栽天麻，其效果良好。

培養(yǎng)菌棒和菌枝的方法相同，可以同時(shí)進(jìn)行。接種時(shí)可采用打孔接種法，先將木棒和樹枝截成段，再用打孔器打孔（每隔約６厘米一９厘米打一個(gè)孔），象黑木耳段木栽培法那樣，向孔內(nèi)接菌種，進(jìn)行培養(yǎng)。也可以采用砍魚鱗口接種法，將菌材截成５０厘米一 60 厘米長的段，用刀每隔９厘米一１２厘米砍一個(gè)魚鱗口，深度以露出木質(zhì)部０．５厘米為宜。

培養(yǎng)方法：可以采用坑培法。半坑式培養(yǎng)法、地面砌池培養(yǎng)法等多種形式，但其培菌方法是相同的。下坑（池）培養(yǎng)時(shí)，先向坑（池）底層鋪一層基礎(chǔ)培養(yǎng)料，再放一層菌棒、菌技，向接種孔或魚鱗口內(nèi)塞滿蜜環(huán)菌原種菌種，再撒上薄薄一層原種菌種，再鋪上一層培養(yǎng)料。第二層直到第五、六層，方法與第一層相同。如果不用菌種，也可用切碎的帶菌索的段木，放在菌棒、菌枝旁邊，也能起到菌種擴(kuò)大培養(yǎng)作用，也可用伴栽天麻的舊菇木和新菌材穿插排放，最上層同樣鋪上６厘米厚的基礎(chǔ)培養(yǎng)料，澆透水（土壤含水量４０％左右），再用土封頂。在２０－２５度條件下，１個(gè)月左右，即長好蜜環(huán)菌菌索。這時(shí)可將菌棒、菌枝挖出，用作伴栽天麻和專一培養(yǎng)蜜環(huán)菌子實(shí)體食用。

（三）蜜環(huán)菌的利用

常食蜜環(huán)菌于實(shí)體（菇），能治療夜盲癥，促進(jìn)眼明，還能醫(yī)治人體皮膚干燥等癥。